化药制剂检测

一、引言

Eucrisa^®是辉瑞旗下 Anacor Pharmaceuticals Inc. 拥有的一款专禾刂参考上市药物（RLD）产品，其软膏含有2% 的Crisaborole，适用于治疗轻度至中度的湿疹（特应性皮炎）。该产品的专禾刂预计于2026年12月14日到期。

Teledyne Hanson 开发并验证了一种使用 Phoenix RDS（自动化扩散测试仪）进行 Eucrisa 体外释放测试（IVRT）的方法。经过验证的 IVRT 方法可用于支持仿制药产品与参考上市药物（RLD）生物等效性（BE）的证明。美国食品和药物管理局（US FDA）建议采用 IVRT 方法来评估药品的一致性，这在 SUPAC-SS 指南中有详细说明^{[1, 2]}。此外，IVRT 也在美国药典（USP）的通用章节<1724>中被确立为规范程序，该章节描述了测试程序、设备和统计方法，以证明产品的相似性或一致性^[3]。对于某些类型的产品，FDA 的法规通常要求仿制产品在定性（Q1）和定量（Q2）上与参考上市药物相同^[4]。FDA 还提供了物理化学和结构特性（统称为 Q3）的推荐表征方法，这些方法可以用来识别拟议中的仿制（测试）局部用药剂型，并描述可能对其性能至关重要的药物产品属性，以支持在比较两种局部用药产品的 Q3 属性时证明其生物等效性（BE）^[5]。

近期，人们对将 IVRT 方法作为附加措施来证明产品相似性产生了极大兴趣，这在简化新药申请（ANDA）中尤为突出。美国 FDA 已发布针对 Crisaborole 2% 的产品特定草稿指南^[6]。欧洲药品管理局（EMA）也发布了一份关于使用 IVRT 程序来评估产品质量和支持局部用药产品等价性的指导文件^[7,8,9]。

二、化学原料及制剂

Crisaborole 认证参考标准品购自 Sigma Aldrich。高效液相色谱（HPLC）级乙腈和乙醇（95%）购自 Cole Parmer。Eucrisa（2% Crisaborole）的参考上市药物（RLD）从当地药房购买，批号为 SDAF；有效期至2024年3月。该产品由辉瑞公司分销。特别在实验室生产了含有标签上标示量的50%、100%和150%的Crisaborole（2%）的局部用产品，用作测试产品，并标识为Crisaborole（2%）。这些产品由一名经过良好培训的科学家在印度孟买斯瓦米·维韦卡南达教育协会（VES）药学院实验室内，在一位经验丰富的药学教授的监督下制造。本研究工作的部分分析也是在同一设施内进行的。

三、反相高效液相色谱（RP-HPLC）

反相高效液相色谱（RP-HPLC）通过内部验证的高效液相色谱系统（岛津科学，型号LC-2010）来测定IVRT样品中的Crisaborole浓度。该系统配备了光电二极管阵列（PDA）检测器，并于2023年8月重新校准。整个研究过程中使用了Kromasil C18色谱柱（4.6 x 150 mm, 5 µ）。流动相由0.05%的四氢呋喃（THF）和水与乙腈按55:45的比例混合而成，流速为1.0 mL/min，进样量为10 µL。色谱柱温度保持在35°C，自动进样器在整个色谱运行过程中保持在15°C。洗脱液在250 nm波长下进行监测。

四、IVRT方法的开发

IVRT方法的开发是在Teledyne Hanson的研究实验室完成的。该方法通过评估膜的惰性、Crisaborole在受体介质中的溶解度、线性、精密度、重现性、灵敏度、特异性、选择性及其他参数进行了验证。详细的方法和验证数据根据Teledyne Hanson研究的内部政策和程序存储。

五、Crisaborole的体外释放测试

该研究按照美国FDA的《半固体制剂放大生产和上市后变更指南》（SUPAC-SS）进行。垂直扩散池（VDC）的接收室填充了10 mL的0.5%醋酸溶液，溶剂为水、四氢呋喃和乙醇按55:15:30 V/V的比例混合，并保持在32±1°C；每个池子上安装了尼龙膜。大约30分钟后，细胞达到平衡，然后在膜上施加约400 mg的2% Crisaborole。为了防止蒸发并保持产品完整性，供体室用玻璃盘覆盖。在测试期间，使用设置在400 rpm的磁力搅拌器持续搅拌接收液。

六、释放速率的计算

释放速率是使用Higuchi模型计算得出的，该模型假设测试条件完镁。考虑到由于替换导致的接收介质的明显稀释，每个时间点的浓度都是通过配备PDA检测器的RP-HPLC测定的。不同取样时间的接收介质中Crisaborole的浓度以及累计释放药物量是通过内部验证的Microsoft Excel电子表格计算得出的。释放速率对应于绘制的药物释放量（μg/cm²）与时间平方根（√t）的回归线斜率，并且受样本体积、细胞体积和细胞孔径的影响。因此，这些参数在设备资格认证过程中得到了验证。

七、统计分析

如美国药典（USP）通用章节<1724>所述，使用统计方法计算了参考上市药物（RLD）产品制剂（“已上市”）和每种Crisaborole测试制剂（“内部”）的释放速率，以计算测试/参考（T/R）比值。使用六个扩散池对两种产品进行测试，因此共获得了36个T/R比值，并按从低到高的顺序进行排列。按照要求，从列出的T/R比值中确定90%置信区间（CI），其中第8个和第29个比值分别是下限和上限。当90% CI在75%–133.33%范围内时，认为产品等效。IVRT研究是根据FDA的SUPAC-SS指南^[1]进行的。测试产品，即内部Crisaborole（2%）与参考产品Eucrisa（Crisaborole）2%进行了比较，如图1所示。

根据SUPAC-SS指南^[1]，将样品随机放置在垂直扩散池上作为测试（T）和参考（R）产品。将R和T的累积药物释放量分别绘制成时间平方根的函数图。由于常见的测试误差如气泡、膜缺陷和非正态分布的产量测量，使用了非参数统计技术来评估测试结果。由于在IVRT期间预计会出现一些异常值（例如，由于气泡形成），因此使用了对这类异常值存在较为抗性的非参数方法。如USP通用章节1724所建议，使用Mann-Whitney U检验来计算参考和测试产品斜率比的90%置信区间（CI）。

八、比较两种产品的IVRT

当RLD的Crisaborole 2%软膏（称为Eucrisa）与一种内部制造的Crisaborole（2%）进行比较时，如表1所示。两种产品释放速率的比较表明它们之间存在不一致性（图1）。在研究结束时，两种产品显示出类似的释放量；最初时间点数据的差异是导致两种产品轮廓不匹配的原因。尽管两种产品都含有2%的Crisaborole，但在辅料类型和数量以及Q3因素方面的差异可能影响了研究结果。

表1. Eucrisa参考上市药物（RLD）与内部产品比较

图1.Eucrisa参考上市药物（RLD）与内部产品比较

九、RLD在两个不同实验室中的比较性体外释放测试

在两个不同的实验室中获取的RLD，即Eucrisa Crisaborole Ointment 2%软膏的IVRT结果进行了对比，并展示在表2中。对两个实验室数据之间的释放率进行比较表明，如果按照指示的测试方法进行，将会产生相同的结果。释放率的图形表示见图2。

表2. 在两个不同实验室测试的Eucrisa RLD的IVRT数据

图2. Eucrisa RLD在两个不同实验室的IVRT数据

十、结论

根据美国FDA针对Crisaborole的草案指南、SUPAC-SS非无菌半固体剂型指南以及USP通用章节<1724>的推荐，对自制产品和批准的Crisaborole RLD产品进行了体外释放测试（IVRT）。自制的Crisaborole (2%) 和RLD的IVRT研究结果没有达到75%-133.33%的接受标准。通过比较仿制药，表明这些在所使用的分析测试方法下，它们的释放速率并不等同。这种不等同可能是因为仿制制剂与RLD在Q1/Q2上不同；可能主要原因是在它们的配方中使用了不同等级的聚合物。然而，在不同实验室获得的RLD样品的测试结果相互匹配，并且用50%、100%和150%标示量的2% Crisaborole自制产品的特异性符合方法特异性和灵敏度标准的接受标准。

可以得出结论，IVRT方法非常有助于准确区分释放速率，这可能反映了产品性能的差异或相似性。此外，结果表明开发的IVRT方法和使用的工具具有检测配方变化的强大能力。研究中获得的结果提供了证据，表明Phoenix RDS设备和经过验证的测试方法有能力准确测定局部用药产品中Crisaborole的释放率。这两者的结合可靠地提供了有说服力的数据，这些数据可以用于生物豁免申请中。

十一、参考

1. Nonsterile Semisolid Dosage Forms: Scale-Up and Post approval  Changes (SUPAC-SS): Chemistry, Manufacturing, and Controls;  In Vitro Release Testing and In Vivo Bioequivalence Documentation; Guidance for Industry; U.S. Department of Health and  Human Services, Food and Drug Administration, (CDER).  

2. In Vitro Release Test Studies for Topical Drug Products Submitted  in ANDAs Guidance for Industry. U.S. Department of Health  and Human Services, Food and Drug Administration, CDER,  Oct 2022 

3. <1724> Semisolid Drug Products — Performance test, The United States Pharmacopoeia and National formulary USP 41–NF  36. The United States Pharmacopoeia.  

4. Controlled Correspondence Related to Generic Drug Development Guidance for Industry U.S. Department of Health  and Human Services Food and Drug Administration CDER,  December 2020  

5. Physicochemical and Structural (Q3) Characterization of Topical  Drug Products Submitted in ANDAs Guidance for Industry, U.S.  Department of Health and Human Services Food and Drug  Administration CDER, October 2022 

6. Draft Guidance on Crisaborole: U.S. Department of Health and  Human Services, Food and Drug Administration, CDER, Recommended Feb 2018; revised Feb 2019  

7. Draft guideline on quality and equivalence of topical products,  European Medicines Agency. Committee for Medicinal Products for Human Use. London, UK. October 2018.   

8. Mudyahoto NA, Rath S, Ramanah A, Kanfer I. In Vitro release  resting (IVRT) of topical hydrocortisone acetate creams: A  novel approach using positive and negative controls. Dissolution Technology. 2020 Feb 1;27:6-12. 9. Purazi, P.; Rath, S.; Ramanah, A.; Kanfer, I. Assessment of  “Sameness” and/or Differences between Marketed Creams  Containing Miconazole Nitrate Using a Discriminatory in  vitro Release Testing (IVRT) Method. Sci. Pharm. 2020, 88.